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金擔子素A
  • 產品貨號:
    BN25331
  • 中文名稱:
    金擔子素A
  • 英文名稱:
    Aureobasidin A
  • CAS號:
    127785-64-2
  • 品牌:
    Biorigin
  • 貨號

    產品規格

    售價

    備注

  • BN25331-1mg

    1mg

    ¥650.00

    ≥95%

  • BN25331-5mg

    5mg

    ¥2400.00

    ≥95%

產品描述

image.png

保存:4℃保存。

產品說明: 

     金擔子素 A(Aureobasidin A,AbA)是從絲狀真菌 Aureobasidium pullulans No. R106 中 分離出來的環酯肽類抗生素,具有很強的抗真菌能力。在較低的濃度下(0.1-0.5μg/ml)即可 對酵母產生毒性。對其敏感的真菌種類包括:出牙酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粟酒 裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、光滑念珠菌(Candida glabrata)、構巢曲霉 (Aspergillus nidulans)和黑曲霉(A. niger.)。作用機制在于 AbA 抑制了真菌生長所依賴 的肌醇磷酰胺(inositol phosphorylceramide,IPC)合成酶的活性,干擾鞘脂合成,從而進一 步殺死菌株。編碼 IPC 合成酶的基因研究較多的有來自釀酒酵母菌的 AUR1 基因,以及構 巢曲霉的 AURA 基因,兩者具有同源性。通過對這些編碼基因進行突變即可使得菌株對 AbA  產生抗性,如 AUR1-C 基因。

     AbA 非常適合用作陽性克隆子篩選用的藥物選擇性標記。AbA 抗性也是酵母單/雙雜交研 究中理想的報告子。本品為溶于甲醇的 AbA 溶液,濃度為 1 mg/ml。具體的工作濃度取決于 宿主細胞的敏感度(見表 1.AbA 對各種酵母菌的最低抑菌濃度(MIC))。

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產品性質: 

分子式(Formula):C60H92N8O11 

分子量(Molecular weight):1100 

純度(Purity):≥95% 

熔點(Melting point):155-157℃ 

結構式(Structure):image.png

操作步驟(抗 AbA 的酵母轉化系統): 

1. 加入 0.5 ml 過夜培養的酵母到 50 ml YPD 培養基中(配方:1L 液體培養基含有 10g  yeast extract,20g polypeptone,20g D-glucose;固體培養基另外加入 2%瓊脂)。 

2. 30℃培養約 6 小時,測定 OD660 為 1~2。使用二倍體時,測定 OD660 為 2~4。 

3. 1,000×g 離心 5 分鐘。 

4. 用 10 ml Solution A(配方:100 mM Lithium acetate,10 mM Tris-HCl pH 7.5,1 mM EDTA) 懸浮沉淀,1,000×g 離心 5 分鐘。 

5. 用 Solution A 重懸沉淀,直到 OD660 為 150。 

6. 在管內分取 100μl 細胞懸浮液,30℃培養 1 小時。 

7. 加入 5μg 載體(環狀或線性 DNA)和 150μg Carrier DNA(已經過 100℃加熱 10 分鐘, 并迅速冷卻)。 

   注意:pAUR101 需使用線性 DNA 進行轉化。使用環狀 DNA 會降低轉化效率甚至轉化不成 功。pAUR112 和 pAUR123 需使用完整的質粒 DNA 進行轉化。

8. 加入 850 μl Solution B(配方:取 40 g Polyethylene Glycol 4000 溶于 100 ml Solution A  充分溶解,需要現用現配),輕輕混勻。 

9. 30℃培養 30 分鐘后,42℃培養 15 分鐘。 

10. 室溫放置 10 分鐘。 

11. 5,000 rpm 離心 1 分鐘,用 5 ml YPD 培養基懸浮沉淀。 

12. 30℃培養 6 小時~過夜。 

13. 5,000~10,000 rpm 離心,用 1-10 ml 0.9% NaCl 懸浮沉淀。

14. 在 YPD 選擇培養基平板(含有一定濃度的 AbA,依菌株類型而定)上接種 100 μl 細胞 懸液。30℃培養 3-4 天后轉化完成。 

15. 挑取陽性轉化子,和/或測定轉化效率(以每微克質粒 DNA 轉化的菌落數來表示)。

注意事項: 

1. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 

2. AbA 的最佳工作濃度因宿主細胞不同而有差異,可根據最低抑菌濃度(MIC)來確定。

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