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肝素是一種含硫酸酯的酸性多糖，將它偶聯到交聯及活化的瓊脂糖凝膠上，該填料具有很高的物理化學穩定性。肝素能和凝血因子和其他血漿蛋白，脂蛋白，蛋白質合成因子，作用 于核酸和類固醇受體的酶，所以肝素瓊脂糖凝膠可以用于這類物質的純化。

1 親和填料特性

*層析柱10mm*20cm，柱床高度5cm，20 °C

2 使用方法 

肝素-瓊脂糖凝膠 HP 對于不同的樣品的親和力不同，吸附載量取決于流速、pH、緩沖液組成和溫度等參數。 

2.1 裝柱

（1）讓所有的材料和試劑均平衡至層析實驗的溫度。配制緩沖液，對所有的緩沖液進行脫氣處理。 

（2）檢查層析柱所有部件，特別是過濾網，密封圈，螺旋塞是否緊密，玻璃管是否干凈和完整。 

（3）根據需要量取相應量的凝膠，用去離子水清洗掉 20%乙醇。 

（4）將柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位，務必使底端無氣泡。

（5）用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內，注意勿使產生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內自由沉降，連結好柱子頂端柱頭。 

（6）打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的 1.33 倍的流速流過，使柱床穩定（注意壓力不要超過填料最大耐壓）。

2.2 樣品的制備 

樣品應完全溶解，并且與結合緩沖液的pH值相同。為了避免堵塞層析柱，我們建議通 過0.45μm過濾器進行離心和過濾，以去除細胞碎片或其他顆粒物質。 

2.3 平衡色譜柱

用5-10個柱體積的結合緩沖液平衡該柱，直到流出液電導和pH不變。 

用于純化血漿蛋白質的常用結合緩沖液是10-20mM檸檬酸鈉緩沖液，pH 7.4。 由于在這些情況下肝素配體充當親和配體，因此緩沖液中加入低濃度的NaCl以消除非特異性離子 相互作用。 在其他應用中，通常推薦使用10 mM 磷酸鈉，pH 7.0或20 mM Tris-HCl，pH 8.0 作為結合緩沖液。

2.4 上樣 

（1）樣品用平衡液配制，樣品一定要離心或過濾后上樣。鹽濃度太大的樣品需要處理后再配。 

（2）一般情況是讓目標產品結合在柱子上，用平衡液洗去雜質和沒有結合的蛋白，再選擇一種洗脫液洗下目標產品。

2.5 洗脫 

不同的樣品，吸附和洗脫方法不相同，可以根據相關的文獻進行。通常通過增加緩沖液的離子強度來進行洗脫。最常使用1.5-2 M NaCl，KCl或（NH4）2SO4線性梯度或梯度洗脫。

3 在線清洗 

先用0.1M Tris-HCl pH7.0緩沖液洗3個柱床體積，然后用0.1M NaOH含2M NaCl流洗3個床體積，最后用20%乙醇洗3個床體積即可。長時間用酸堿洗填料會是填料的吸附能力下降，所以清洗要盡量縮短時間。

4 保存 

4-8℃密閉保存。使用完的填料，用純水徹底沖洗，最后保存在 20%乙醇中，4℃保存。 

5 注意事項： 

（1）上樣之前，樣品必須經過膜過濾及去除色素，否則雜質及色素會被吸附到填料上，影響填料的正常使用。所有的緩沖液均需要用 0.45um 的過濾器過濾。 

（2）在使用過程中，避免使用高濃度的強酸強堿，酸和堿的濃度應低于 0.1 摩爾。堿會使流速變慢。 

（3）不同的樣品，吸附和洗脫方法不相同，可以根據相關的文獻進行。