激情深爱五月-激情视频亚洲-激情视频综合网-激情四房-激情婷婷-激情婷婷丁香

一、酵母培養(yǎng)基種類(lèi)及用途 

一缺培養(yǎng)基 

     用于單質(zhì)粒酵母轉(zhuǎn)化篩選，外源基因在酵母中的表達(dá)、異源基因功能互補(bǔ)、酵母單雜交和酵母雙雜交初始質(zhì)粒轉(zhuǎn)化。 

二缺培養(yǎng)基 

     用于雙質(zhì)粒酵母轉(zhuǎn)化篩選，外源基因在酵母中的表達(dá)、異源基因功能互補(bǔ)、酵母單雜交和酵母雙雜交初始質(zhì)粒轉(zhuǎn)化免疫共沉淀，Y187、AH109/Y2HGold、NMY51 酵母雜交實(shí)驗(yàn)， 接合型二倍體篩選。 

三缺培養(yǎng)基 

     用于雙質(zhì)粒酵母轉(zhuǎn)化篩選和報(bào)告基因檢測(cè)，外源基因在酵母中的表達(dá)、異源基因功能互 補(bǔ)、酵母單雜交和雙雜交報(bào)告基因檢測(cè)，Y187、AH109/Y2HGold、NMY51 酵母交配實(shí)驗(yàn)后報(bào) 告基因分析（His3，Ade2)。 

四缺培養(yǎng)基 

     用于報(bào)告基因分析，酵母雙雜交和酵母三雜交報(bào)告基因檢測(cè)，Y187、AH109/Y2HGold、NMY51 酵母交配實(shí)驗(yàn)后報(bào)告基因分析（His3，Ade2)。 

五缺培養(yǎng)基 

     用于報(bào)告基因分析和表型分析，酵母三雜交報(bào)告基因檢測(cè)(His3，Ade2)、酵母營(yíng)養(yǎng)缺 陷型分離鑒定和表型分析。 

六缺培養(yǎng)基 

     用于報(bào)告基因分析、表型分析和藥物毒理分析，酵母三雜交報(bào)告基因檢測(cè)、酵母營(yíng)養(yǎng)缺 陷型分離鑒定和表型分析、藥物毒理分析。

Rich medium 

     Rich medium 包括 YPD、YPDA、YPD Plus 系列培養(yǎng)基，也可以稱(chēng)為完全培養(yǎng)基。 YPD Medium 由精選的蛋白胨、酵母提取物和葡萄糖按適當(dāng)比例混合組成；YPDA 培養(yǎng)基是 在 YPD 培養(yǎng)基中添加了適量的硫酸腺嘌呤；YPD Plus 相比于 YPDA 的營(yíng)養(yǎng)更為豐富， 可直接用于釀酒酵母感受態(tài)的復(fù)蘇，可以提高轉(zhuǎn)化效率。YPD Agar、YPDA Agar 分別在 YPD、YPDA 基礎(chǔ)上加入了 Agar，作為固體培養(yǎng)基倒板用。YPD 系列培養(yǎng)基用于釀酒酵母 的常規(guī)培養(yǎng)。

二、酵母培養(yǎng)基的配制 

（1） Rich Liquid Media (Broth) 

     1. 取 50g 的 YPD/YPDA 加 1L 的去離子水中溶解； 

     2. 調(diào)節(jié) pH 至 6.5，121℃高壓滅菌 15min； 

     3. 避光、室溫條件下儲(chǔ)存滅菌培養(yǎng)基。 

（2） Rich Plating Media with Agar 

     1. 取 70g 的 YPD Agar/YPDA Agar 加 1L 的去離子水中溶解（瓊脂在高溫滅菌后溶解）； 

     2. 調(diào)節(jié) pH 至 6.5，121℃高壓滅菌 15min； 

     3. 冷卻到 50℃把培養(yǎng)基倒入平板中，室溫使其凝固，封口膜封好后倒置保存在 4℃冰箱。

（3） Minimal SD Base 

     1. 在 1L 去離子水中加入 26.7g 的 Minimal SD Base，然后再加入相應(yīng)量的缺陷氨基酸， 攪拌溶解； 

     2. 調(diào)節(jié) pH 至 5.8，121℃高壓滅菌 15min； 

     3. 避光、室溫條件下儲(chǔ)存滅菌培養(yǎng)基。 

（4） Minimal SD Agar Base 

     1. 在 1L 去離子水中加入 46.7g 的 Minimal SD Base，然后再加入相應(yīng)量的缺陷氨基酸， 攪拌溶解； 

     2. 調(diào)節(jié) pH 至 5.8，121℃高壓滅菌 15min； 

     3. 冷卻到 50℃把培養(yǎng)基倒入平板中，室溫使其凝固，封口膜封好后倒置保存在 4℃冰箱。

（5） DO（缺陷氨基酸）類(lèi)培養(yǎng)基的配制 

     1. 在 1L 去離子水中加入相應(yīng)量的 DO 培養(yǎng)基，然后再加入 26.7g Minimal SD Base，攪拌 溶解； 

     2. 調(diào)節(jié) pH 至 5.8，121℃高壓滅菌 15min； 

     3. 4℃冰箱避光儲(chǔ)存已經(jīng)滅菌的液體培養(yǎng)基。

     或：1. 在 900ml 去離子水中加入相應(yīng)量的 DO 培養(yǎng)基，然后再加入 6.7g YNB，攪拌溶解； 

     2. 調(diào)節(jié) pH 至 5.8，121℃高壓滅菌 15min；

     3. 4℃冰箱避光儲(chǔ)存已經(jīng)滅菌的液體培養(yǎng)基； 

     4. 使用時(shí)再加入 100ml 已滅菌的 20%葡萄糖。

（6） SC（缺陷氨基酸+YNB）類(lèi)培養(yǎng)基的配制

     1. 在 1L 去離子水中加入相應(yīng)量的 SC 培養(yǎng)基，然后再加入 20g 葡萄糖，攪拌溶解； 

     2. 調(diào)節(jié) pH 至 5.8，121℃高壓滅菌 15min； 

     3. 4℃冰箱避光儲(chǔ)存已經(jīng)滅菌的液體培養(yǎng)基；

     或：1. 在 900ml 去離子水中加入相應(yīng)量的 SC 培養(yǎng)基，攪拌溶解； 

     2. 調(diào)節(jié) pH 至 5.8，121℃高壓滅菌 15min； 

     3. 4℃冰箱避光儲(chǔ)存已經(jīng)滅菌的液體培養(yǎng)基； 

     4. 使用時(shí)再加入 100ml 已滅菌的 20%葡萄糖。 

（7） SD（缺陷氨基酸+YNB+葡萄糖）類(lèi)培養(yǎng)基的配制 

     1. 在 1L 去離子水中加入相應(yīng)量的 SD 培養(yǎng)基，攪拌溶解； 

     2. 調(diào)節(jié) pH 至 5.8，121℃高壓滅菌 15min； 

     3. 4℃冰箱避光儲(chǔ)存已經(jīng)滅菌的液體培養(yǎng)基。 

（8） SD with Agar（缺陷氨基酸+YNB+葡糖糖+Agar）類(lèi)培養(yǎng)基的配制 

     1. 在 1L 去離子水中加入相應(yīng)量 SD with Agar 培養(yǎng)基，攪拌溶解（瓊脂在高溫滅菌后溶解）；

     2. 調(diào)節(jié) pH 至 5.8，121℃高壓滅菌 15min；

     3. 冷卻到 50℃把培養(yǎng)基倒入平板中，室溫使其凝固，封口膜封好后倒置保存在 4℃冰箱。

注意事項(xiàng)： 

     1. 在配制酵母缺陷培養(yǎng)基時(shí)，培養(yǎng)基會(huì)變色，由淺黃到深褐色不等，對(duì)酵母的生長(zhǎng)不會(huì)產(chǎn) 生嚴(yán)重影響。 

     2. DO 類(lèi)和 SC 類(lèi)培養(yǎng)基均不含葡萄糖。葡萄糖高溫滅菌會(huì)有碳化現(xiàn)象，控制好滅菌溫度和時(shí)間，葡萄糖的微量碳化對(duì)實(shí)驗(yàn)并無(wú)太大影響。如有特殊要求可將 20%葡萄糖單獨(dú)滅菌，待使用時(shí)再加入。

     3. 缺陷培養(yǎng)基的 PH 值在 5.5-6.5 范圍內(nèi)都是比較適合酵母生長(zhǎng)的，此類(lèi)試劑粉末的 PH 已 經(jīng)過(guò)調(diào)試，使用時(shí)只需要稍微調(diào)整即可。